I. Metode za preučevanje kvantitativne in kvalitativne sestave mikroflore kože rok

PRAKTIČNA SESSIJA št. 7

Tema: Predstavniki normalne človeške mikroflore

Cilj: Preučiti osnovne vzorce razvoja, sestave in habitata normalne človeške mikroflore. Za določitev kvalitativne in količinske sestave mikroflore v vseh lokalizacijah v normalnih pogojih in v patoloških razmerah.

Preučiti strukturo bakterijskega biofilma.

1. Kakovostna in količinska sestava normalne mikroflore človeškega telesa in njegova vloga v človeškem življenju.

2. Metode za določanje sestave človeške mikroflore

3. Metode izolacije in pogoji gojenja mikroorganizmov, predstavniki normalne mikroflore človeka

4. Metode za popravljanje sestave človeške mikroflore

5. Značilnosti uporabe zdravil za uravnavanje sestave človeške mikroflore

Lahko:

1. Izvesti mikrobiološko študijo mikroflore različnih ekotopov človeškega telesa, da bi ocenili dosežene rezultate.

1. Normalna mikroflora človeškega telesa: koncept, značilnost (obvezna in fakultativna, parietalna in abdominalna, pogojno patogena mikroflora).

2. Mikroflora različnih ekotoksov: koža, zgornji dihalni trakt, ustna votlina, prebavni trakt.

3. Funkcije normalne človeške mikroflore, ki vplivajo na zdravstveno stanje.

4. Fiziološke funkcije normalne mikroflore, ki določajo njegovo pozitivno vlogo v človeškem telesu.

5. Odpornost na kolonizacijo in lastnosti mikroorganizmov normalne mikroflore zagotavljajo.

6. Navedite glavne dejavnike, ki vodijo k razvoju disbakterioze.

7. Navedite metode mikrobiološke diagnoze disbakterioze.

8. Disbakterioza: koncept, vzroki, preventivni ukrepi, mikrobiološka diagnoza.

9. Pripravki za korekcijo normalne človeške mikroflore (probiotiki, prebiotiki in sinbotiki).

10. Lastnosti predstavnikov normalne mikroflore, ki tvorijo probiotike, kar jim omogoča uporabo pri zdravljenju dysbakterioze.

I. Metode za preučevanje kvantitativne in kvalitativne sestave mikroflore kože rok

Za preučevanje mikroflore kože se uporabljajo tri skupine metod. To so metode tiskanja, brisov in biopsij. Bolj učinkovite so metode brisov in biopsij.

Za pridelke način tiskanja uporabite odtise - sterilne zaprte plastične posode. V odtisih s premerom 2,4 cm (površina 4,52 cm 2) nalijemo 1,5 ml selektivnega medija s staljenim agarjem. Za test se odpre nazaj tiskanje, nežno pritisnite agar na kožo 20 sekund, po katerem se kultura postavi v termostat. Rezultat testa je ocenjen s številom enot, ki tvorijo kolonije (CFU) na 1 cm 2 kože. Prstni odtisi proizvajajo manj mikroorganizmov kot z drugimi metodami.

Za določitev števila mikroorganizmov na enoto površine kože rok (cm 2)

naredi izpušni test. Da bi to naredili, navlažite sterilni bris v sterilni slani raztopini, skrbno obrišite dlani z brisačo in sirimo s sesanjem na gostem hranilnem sredstvu (Endo). S pomočjo ravnila merite dolžino in širino dlani in izračunajte njegovo območje __________ cm 2

V naslednji uri ocenite kvalitativno in količinsko sestavo mikroflore v svojih pridelkih:

Skupno število kolonij _______________

Število laktozo pozitivnih kolonij _______________

Stopnja kontaminacije kože roke __________________ na 1 cm 2

Način, s katerim se vzorec kožnega tkiva odstrani s posebnim orodjem, po katerem je posejan na posebnem mediju ali pregledan pod mikroskopom.

P. Mikroflora ustne votline

V ustni votlini kot ekološko nišo predstavljajo naslednji biotopi: sluznica, kanali žlez slinavke s slino, gingivalno tekočino in gingivalno področje, ustna tekočina, blago zobno blato (zobna plošča).

Mehka plošča (zobna plošča) je najbolj kompleksen in večkomponentni biotop, ki tvori na površini zoba. Zobna ploka se začne v 1-2 urah po ščetkanju zob, spremembe v sestavi mikrobiocenoze pa se pojavijo v dinamiki nastajanja. Splošni trend je prehod od prevladujočih aerobnih in fakultativnih anaerobnih mikroorganizmov, predvsem kokijev, za obvezne anaerobne palice in mučne oblike.

  1. Ocenite kvalitativno in količinsko sestavo mikroflore v brisu iz ustne votline zdravega človeka.

Značilnosti normalne mikroflore človeka in njene biološke vloge. Metode študija. Gnoobiologija. Disbakterioza. vzroki za razvoj, načeli korekcije

Metode za proučevanje normalne mikroflore:

I. Bakteriološki. Samopomoč za tiste biotope, v katerih živi veliko različnih mikroorganizmov - ustna votlina, črevesje, vagina, dajejo splošno predstavo o mikrobi.

Ii. Bakteriološki. za tiste biotope s široko paleto mikroorganizmov - ustno votlino, črevesje, vagino. Osnovna načela bakterioloških metod

1, Uporaba kakovosti in kvantifikacije mikroflore

2, primarni material za sejanje brez obogatitve.

3. Uporaba velikega števila hranilnih snovi, izbira pogojev gojenja. V normalnem delovanju telesa igrajo pomembno vlogo pri vzpostavljanju odnosov osebe s svojimi mikroorganizmi. Večina avtohtonih mikroorganizmov v različnih biotopih ima izrazite antagonistične lastnosti v odnosu do drugih, zlasti patogenih predstavnikov mikrobni svet. Ta zaščitna vloga mikroflora telesa, človeka, je omogočila, da jo pripisujemo dejavnikom naravne imunosti. Antagonizem, izražen v bifidumbakteriji in laktobaciliju, je posledica sproščanja kislin, alkoholov, lizocima. bakteriocini z visoko biokemijsko aktivnostjo. Poleg tega imajo ti mikroorganizmi številne uporabne lastnosti. Zavirajo sproščanje enterično-patogene Escherichie iz termolabilnega toksina, izboljšajo absorpcijo kalcijevih ionov, vitamina D in železa iz črevesja, s čimer preprečujejo razvoj rahitisa, sintetizirajo aminokisline in beljakovine, vitamine B,. V;. K, riboflavin, nikotinske, pantotenske in folne kisline, ki se absorbirajo v črevesju in sodelujejo v presnovnih reakcijah telesa. Visoka vsebnost bifidumbakterij in laktobacilov v črevesju do neke mere preprečuje nastanek kancerogeneze.

Časovna nastanek mikrobiocenoze in njena kolonizacija bifilumbakterij pri dojenčkih vpliva na zdravje ne samo v zgodnji dobi, temveč tudi na celotno nadaljnjo življenjsko aktivnost rastočega organizma in odraslega

Mikroflora gastrointestinalnega trakta vpliva na morfološko strukturo črevesne sluznice in njeno adsorpcijsko sposobnost, razdeli kompleksne organske snovi in ​​mikroorganizme tega biotopa spodbujajo prebavo. Presnova lipidov, nevtralnih maščob in maščobnih kislin, absorpcija žolčnih kislin v črevesju, razgradnja žolčnih kislin in tvorba stercobilinogena, koprosterola in deoksiholne kisline sta povezana z vitalno aktivnost črevesnih bakterij. Ločeni procesi kompleksnega presnovka beljakovin so povezani tudi z življenjsko aktivnostjo črevesne mikroflore, katere predstavniki so sposobni razkrojiti proteine ​​do končnih izdelkov, posledični indol, skatol in fenol pa spodbujajo peristaltizacijo in ustvarijo ugodne pogoje za obstoj mikroflore debelega črevesa. Kisline in plini, ki nastajajo pri normalnih fermentacijskih procesih, ki se pojavljajo ob sodelovanju mikroorganizmov, pozitivno vplivajo na metabolizem, gibljivost in topografijo črevesja, proces absorpcije in tvorbe kate. Črevesni mikroorganizmi sodelujejo pri razstrupljanju ksenobiotikov iz zunanjega okolja in nastalih toksičnih metabolnih produktih s svojo biosorpcijo ali transformacijo v netoksične izdelke.

Za telo velikega pomena je imunizirajoča lastnost mikroflore telesa zdrave osebe. Bakterijska mikroflora prispeva k organizaciji in zorenju imunskega sistema. V eksperimentih na sterilnih živalih (gnotobiont) je bilo dokazano, da se množica bezgavk živali brez kalčkov zmanjša večkrat, število vzrejnih centrov v teh vozliščih pa je v primerjavi s kontrolnimi živalmi desetkrat večje.

Gnotobionti ne morejo ohranjati svojega zdravja, spadati v mikrobno okolje in umreti zaradi nalezljivih procesov, ki jih povzročajo takšne vrste mikroorganizmov, ki jim živali, ki se gojijo pod normalnimi pogoji, sploh niso občutljive.

Za normalno delovanje človeškega telesa je zelo pomembno urediti razmerje makroorganizma in mikroflore, ki živi v telesu, med določenimi vrstami mikrobov, ki živijo v različnih delih človeškega telesa. Ko so obstoječi odnosi moteni, ki jih povzročajo številni učinki, ki jih doživlja oseba (hipotermija, pregrevanje, motnje spanja, duševni stresni učinki, ionizirajoče sevanje itd.), Simbiozni mikrobi širijo iz njihovih habitatov, prodrejo v notranje okolje in povzročajo patološke procese. Kršitev kvalitativne in količinske sestave mikroflore človeškega telesa, njen prenos na druge biotope je manifestacija disbakterioze (dysbiosis, dismicrobiosis).

Laboratorijska diagnoza disabererioze temelji na določitvi kakovostne in količinske sestave mikrobov v mikroenezi posameznega biotopa v kliničnem vzorcu. Bakterije in glive so navadno identificirane le do rodu (Biildobacterium, Lactobacillus, Candida itd.).

Poleg tega so določeni tudi oportunistični mikroorganizmi Komjeumpaiiuio. ki identificirajo do vrste. Detekcija posameznih posameznikov patogenih učinkovin (povzročitelji dysenterije, patogeni Escherichia, Salmonella) jasno kažejo na skrajno stisko v biotonu. Analiza dysbakterioze je dolgotrajna, zahteva veliko dela in materialov.

V skladu z različnimi priporočili se razlikuje več stopenj dysbakterioze (od 3 do 5), ki se določijo s kombinacijo mikrobioloških in kliničnih podatkov. Disbakter je klinično-mikrobiološki sindrom, ki prav tako označuje patološko spremenjeno stanje mikrobne bolezni specifičnega biotopa - debelo črevo mokrišč, ustne votline, kože itd. Mikrobiološki del sklepa temelji na primerjavi rezultatov, dobljenih s priporočenimi standardi.

Obstaja kompenzirana in dekompenzirana disbakterioza. Klinične manifestacije s kompenzirano varianto so lahko blagi (1-2 stopinjah dysbiosis), včasih je mogoče samopopodobitev brez posebnega zdravljenja. Vendar pa obstaja visoko tveganje za poslabšanje mikrobnih neravnovesij s prehodom v dekompenzirano obliko (3-4 stopinje), kadar je malo verjetno, da je neodvisno zdravilo.

Dekompenzacije microbocenosis kaže velik pomanjkljivost bifidobakterij in drugih zaščitnih mikroflore (laktobacili, Escherichia tipično), povečanje širitev in agresije oportunistične aerobne floro. Združenje več predstavnikov takih mikrobov se lahko pojavi v biotopu. Resnost kliničnih simptomov se povečuje, obstaja verjetnost, da bodo oportunistični mikroorganizmi prek celega telesa presegli njihove ekološke niše z razširjanjem. Optimalna taktika za ta pogoj je povezava z osnovno terapijo eubiotikov za normalizacijo mikrobiocenoze v biotopu.

Združene Spremembe zdravljenje disbiocha potrebujejo prostor dodeljeno eubzhpicheskim (probiotične) pripravki "ali farmakološkimi pripravki vsebujejo koncentrat živih liofiliziranih bakterij pri njihovih metabolitov visoka adhezivnost in antagonistično ^ biotski bakterije kolonizirajo biotop - prebavnega trakta, vagine, ustne votline in postopoma izpodriva patogeni in pogojno patogeni mikroorganizmi. Po nekaj časa se ponovno vzpostavi naravna TH eubiosis vnese s sevom eubnoticheskie drog sčasoma izloči iz biotopu

Eubiotiki vključujejo monokomponentna zdravila, kot je Bifilumbacterin. laktobakterij. Kollbaklerina, "Nerola in drugi. Polimerni pripravki vsebujejo 2 ali več vrst mikrobov: bifikol, bifilakt, Linex. biosporin.

Produkti mlečne kisline, sokovi in ​​drugi prehrambeni izdelki probiotičnega delovanja (funkcionalna prehrana) se prav tako uporabljajo za obnovo normalne črevesne mikroflore in preprečujejo dysbiosis v tveganih skupinah. Obogateni so s fiziološko aktivnimi živimi bifidobakterijami, laktobakterijami, propionibakterijami in drugimi mikroorganizmi.

Metode za proučevanje normalne mikroflore

Za preučevanje normalne mikroflore se uporabljajo dve metodi; bakterioskopsko in bakteriološko.

Bakterioskopska metoda. Je velikega neodvisnega pomena za tiste biotope človeškega telesa, v katerih živi veliko različnih vrst mikroorganizmov (ustna votlina, črevesje, vagina). To vam omogoča, da bi dobili splošno predstavo o sestavi mikroflore (prevlado gram / ali Gram + / - bakterije posamezne oblike - koki, diplokokov, streptokoki, bacillus, bacillus, streptobatsilly, fusiform bakterij, prisotnost gliv, itd), in za prepoznavanje tiste mikroorganizme, ki jih ni mogoče gojiti na hranilnih medijih. Bakteriološka metoda. Uporablja se za biotope s široko paleto mikroorganizmov (ustna votlina, črevesje, vagina), opravljene ob upoštevanju podatkov mikroskopije.

Osnovna načela bakteriološkega pregleda:

a) uporaba kvalitativne (sestave vrst) in kvantitativne

(količinsko razmerje različnih vrst) ovrednotenje mikroflore; 6) primarno sejanje materiala brez predhodne obogatitve, saj

obogatitev krši količinsko razmerje vrst; c) uporaba velikega nabora različnih hranilnih snovi, izbire

pogoji gojenja (aerobni, anaerobni, atmosferski2 itd.) Metode pridobivanja gradiva za raziskave:

1. Pridobivanje naravnih iztrebkov <слюна, моча и т.д.).

2. metoda replik; a) natisnejo na površini agarnega medija, b) natisnejo gazo-agarne plošče.

3. Sprejmite metodo z navlaženim tamponom.

4. Aspiracijska metoda (iz interdentalnih prostorov, gingivalnih žepov, zgornjega in srednjega dela respiratornega trakta, aspiracije na filtre).

5. Uvajanje sond v črevesje.

6. Postopek uporabe - odstranitev mikroorganizmov s papirnatimi ali tkaninami na določenem območju.

Nevidni organ, ki tehta 2 kilograma - človeška mikroflora. Zakaj jo potrebujemo?

Na prelomu 21. stoletja je bila zamisel o mikroflori človeškega telesa tvorjena kot drugi organ, ki pokriva črevesno steno, druge sluznice in človeško kožo v obliki staleža. Preostali nevidni, ta "organ" tehta približno dva kilograma in ima okoli 1014 celic (sto milijard) mikrobnih celic. To število je desetkrat večje od števila lastnih celic gostiteljskega organizma, to je humanih celic.

Ideja o enotnosti skupnosti mikroorganizmov, ki živijo v našem telesu, je bila prvotno pripeljana do preučevanja ekoloških in biotehnoloških mikrobnih skupnosti. Izkazalo se je, da mikrobi najprej raje živijo in so pritrjeni na trdno površino in ne prosto plavajo (kot v vodnem okolju rek in oceana, v zraku). Drugič, organizirani so v tako imenovane biofilme, uravnotežene v svoji vrstni sestavi in ​​funkcionalni porazdelitvi članov skupnosti - kot mravlje v mravljišču.

V biotehnologiji si prizadevajo, da izberejo optimalno mikrobiološko skupnost za izvajanje določenih funkcij. To je pomembno pri proizvodnji hrane, drog in aditivov za živila, recikliranju različnih vrst odpadkov, nevtralizaciji onesnaževanja vode in tal z naftnimi proizvodi. Takšne skupnosti imenujemo konzorcijev mikroorganizmov. Praksa je pokazala razvejano povečanje učinkovitosti mikroorganizmov v takšni organizaciji. Konzorcij je na splošno biotehnološki koncept in pomeni mikrobiološko skupnost, posebej zasnovano za doseganje določenega cilja. To (skupnost) določa kvantitativne in funkcionalne odnose. Morajo biti strogo konstantni, v nasprotnem primeru cilj ni dosežen. V biotehnologiji je to razčlenitev proizvodnega procesa (npr. Kefir ali pivo).

Pri ljudeh to ne more biti dovoljeno, njegov bioreaktor (črevo) bi moral delati celo življenje. Zato je narava poskušala organizirati mikrobiološko skupnost tako, da traja vse življenje z največjim nihanjem v koncentraciji posameznih mikrobov. Ne glede na uporabo antibiotikov. Njihova pravilna uporaba skupaj z obnovitvenimi ukrepi vodi v ohranjanje mikroflore v prejšnjem okviru.

Po molekularnih genetskih študijah je sestava mikroflore genetsko povezana znotraj skupnosti in je specifična na ravni sevov za posameznika. To je zelo vzdržen sistem. Ni mogoče uvesti tujca. Ni težko oceniti njegove veliko večje odpornosti proti antibiotikom in vivo v primerjavi s poskusi v jedi Petrija. Dovolj je kapljic antibiotika v skodelici, da bi preprečili rast mikroorganizmov v polmeru 42 mm (visoka občutljivost). Hkrati je črevo še vedno prisotno z dolgoročno uporabo antibiotikov širokega spektra.

Zmožnost črevesne mikrobiote, da ohranja stabilnost v pogojih različnih kemičnih in korpuskularnih tokov, ki potekajo skozi in po mucinu, je izjemna. V skladu s fiziološkimi norme skozi črevesno steno in se prenese po njej vsak dan za deset litrov tekočine, vključno s slino, želodčnega soka z chyme hrane, žolč in jetra in druge skrivnosti. V nasprotni smeri absorpcije se mucin premika, ki mora imeti mikrobov črevesne stene čas za prebavo v monomerne sestavine po stopnji njene tvorbe s pomočjo mukoznih celic.

Posebne študije so pokazale, da v biofilmu drugače v primerjavi s čistimi kulturami bakterij pride do številnih fizioloških procesov, vključno s proizvodnjo metabolitov in biološko aktivnih snovi. Skupnost organizira en genetski sistem v obliki plazmidov - krožne DNK, ki nosi vedenjsko kodo za člane biofilma, opredeljuje hrano (trofej), energijo in druge povezave med seboj in zunanjim svetom. Slednji je dobil posebno definicijo kot socialno vedenje (zaznavanje kvoruma) mikroorganizmov. Reakcija mikroorganizmov na spremembe v okoljskih razmerah v biofilmu je bistveno drugačna od reakcije vsake posamezne vrste v monokulturi. Takšna organizacija zagotavlja njegovo fiziološko in funkcionalno stabilnost in je zato ključ do konkurenčnega preživetja v ekološki niši. Posebna prednost takšne organizacije pri ljudeh je zagotavljanje homeostaze organov, katerih funkcionalnost je odvisna od mikrobov, ki jih naseljujejo.

Zdrava koža, normalna prebava, odpornost na zunanjo okužbo (imunski status) osebe je v veliki meri odvisna od stabilnosti, lahko bi rekli "zdravje" njegove mikroflore.

Prednost kolektivnega odzivanja je negativna: takšna skupnost je težko upravljati od zunaj. Na primer - za zdravljenje bolezni polimikrobnih izvora, če je antibiotik občutljivost mikroorganizmov v biofilma povezana ne ustreza določeni v laboratorijskih preskusih kliničnih izolatov čistih kultur bakterij.

Imunost biofilm praktično izniči dobro idejo popravka dysbacteriosis s pomočjo probiotikov - priprav živih kultur ključnih mikroorganizmov v črevesju - bifidobakterij, laktobacilov, enterobakterij in drugih. Nedvomno ustvarjajo učinek, vendar ne vedno in ne enako kot v teoriji. To je posledica skupne imunitete mikrobiota (organizirane mikroflore) črevesja.

Mikrobi, ki se gojijo umetno, so tuji, kot so organi in tkiva drugih ljudi, ki so presajeni ljudem - darovalcem ali živalim. Zavrnejo se zaradi biološke nezdružljivosti. Biotehnološki probiotiki nimajo "gesla" za vstop mikrobov v črevesni biofilm in zato ostanejo v njej prehodno, kot je mikroflora. Znano je, ki jih podjetja - proizvajalci probiotikov in ne trdijo, da je njihova dopolnila nadoknaditi pomanjkanje fizično ustrezne vsebine probiotičnih mikroorganizmov, vendar pa spodbujajo rast prikrajšano prebivalstvo.

Pomanjkanje preživetja tujih mikrobov te vrste je posreden dokaz o obstoju človeške mikroflore kot neodvisnega organa. Izraz "paracitologija biofilma" se je pojavil kot struktura, podobna tkivu višjih organizmov, kar pomeni izvajanje zakonov, ki so neločljivo povezani z njo.

Obstaja veliko drugih okoliščin, zaradi katerih bi morali človeški mikrobioti obravnavati kot posamično specifične, genetsko določene in, očitno, podedovane. B.A.Shenderovym je bila predlagana (v obliki dokazov avtorskih pravic, pridobljenih v zgodnjih devetdesetih letih prejšnjega stoletja) idejo posameznega ohranjanje mikroflore pri mladih zdravih obdobju življenja določeni osebi z namenom, da doping v prihodnosti v primeru resnih kršitev črevesne bios za namen izboljšanja, sem lahko celo recimo - pomlajevanje.

Gastroenterologi poznajo tudi primere "presaditve" mikroflore pacientu iz relativnega "na klistir" s pozitivnim učinkom popravljanja črevesne diskakterioze.

Sodobne ideje o sestavi črevesne mikrobiote po molekularnih študijah

Podatki o naravi črevesne mikrobiocenoze, ki so se do tedaj zbirali, se zdi dovolj za razumevanje njegovega delovanja kot fiziološko aktivnega človeškega organa. Vendar pa trenutno ni pomanjkanja kvantitativne metode za določanje sprememb v sestavi precej širokega spektra ključnih mikroorganizmov.

Poleg tega je zaželeno, da analiziramo sestavo parietalne črevesne mikrobiote, in ne mikroflora iztrebkov, kot je običajno.

To je v sluznico plast prekriva črevesno sluznico je asimilacijo chyme želodčnimi, absorpcijo bistvenih hranil črevesno steno epitelnih celic in dodatnih proizvodnih mikroorganizmi veliko število biološko aktivnih snovi, encimi, vitamini, antibiotiki, imunostimulanti, kot tudi toksini in metaboliti škodljivo za človeka.

Predpostavlja se, da je pomanjkanje ravnovesja v njihovih proizvodih povezano s patološkimi manifestacijami najrazličnejše narave: črevesnimi motnjami, kožnimi boleznimi, spolnimi disfunkcijami in srčnim popuščanjem. Fekalna mikroflora je odpadek teh procesov, v katerem se proizvodnja mikroorganizmov nadaljuje, vendar v različnih pogojih v primerjavi z zgornjimi črevesnimi odseki. Po besedah ​​znanega strokovnjaka na področju klinične mikrobiologije prof. A.N. Mayansky odraža votlino (prosto živo ali planktonsko) in ne stenski biofilm, ki je bolj stabilen in fiziološki. Citat Mayanskega v zvezi z določanjem črevesne dysbiosis pri fecesu se ne strinja, da "je v resnici drago (še posebej, ker je testiranje priporočljivo opraviti s časom), zamudno študijo z nizko (če ne nič) vrne."

Metoda primerna za reševanje takega problema se je pojavila v Rusiji v začetku devetdesetih let prejšnjega stoletja. Razvili so ga na podlagi raziskav Raziskovalnega inštituta za biološki inženirski inženiring ob podpori akademika RAS G.A. Zavarzina in donacije Ministrstva za ekologijo in zaščito podtalnice Ruske federacije "Ekološka varnost Rusije".

Metoda temelji na odkrivanju prisotnosti mikroorganizmov v okoljskih predmetih (vodo, tla, odtoki itd.) S kemičnimi snovmi, ki so specifične za njih - označevalci iz števila maščobnih kislin, aldehidov in sterolov, ki tvorijo celično steno.

Posebnost pomeni, da take snovi vsebujejo samo lipide mikroorganizmov in niso vsebovane v njihovem življenjskem prostoru. Zato imajo dovolj občutljivo metodo analize, da jih je mogoče odkriti in količinsko opredeliti neposredno v življenjskem prostoru, s čimer se izognemo potrebam, da jih predkužimo v umetnih okoljih. To je bilo mogoče storiti z uporabo metode plinske kromatografije v kombinaciji z masno spektrometrijo (skrajšano kot GC-MS). Njegov rezultat je določitev sestave mikrobnih markerjev s točnostjo 2% relativnega. Skupaj s pripravo vzorcev in izračunom sestave mikrobne skupnosti po posebnem programu je standardni postopek za spremljanje 170 mikroorganizmov v vzorcu traja približno 5 ur (.).

Postopek za detektiranje mikroorganizmi LCD, podobne genetskih označevalcev (PCR, določanje nukleotidnega zaporedja 16sRNK itd), ker sestavek maščobne kisline je deterministična na replikacijo DNA in se reproducirajo v odseku prometnega genoma RNA in naknadno sintezo maščobnih kislin v mitohondrije matriko RNA. Zato je LCD profil bakterij njihova vizitka ali prstni odtis kot prstni odtisi ljudi. Je tako konzervativna kot struktura DNK, vendar je tudi dovzetna za mutacije pod vplivom okoljskih dejavnikov.

V skladu s sodobnimi koncepti so mikroorganizmi, ki prebivajo v črevesju, glavni predelovalci živil, ki jih ljudje porabijo v molekularni obliki. Samo v tej obliki se lahko s sesanjem na črevesni steni dovede v krvjo in nato v celice telesa. Poleg tega mikrobi v svojih celicah sintetizirajo številne potrebne človeške snovi - vitamine, encime, esencialne aminokisline in druge. Zdravje je odvisno od stabilnosti tega procesa, torej od tona in kakovosti življenja osebe.

Kot je navedeno, za nadzor in upravljanje črevesne mikrobiote je potrebna kvantitativna metoda za analizo njegove sestave in je bila pridobljena kot posredna določitev njegove sestave glede na podatke masne spektrometrije maščobnih kislin. S to metodo so zbrani podatki o parietalnih mikroflore jejunum, ileum in debelega črevesja GC-MS analizo mikrobnih markerjev v biopsijo dobljenih na oddelku za patologijo tankega črevesa TSNIIG profesorja Pafenovym AI vodi, v študijah pri zdravih prostovoljcih in bolnikih z IBS črevesje in diarejo, povezano z antibiotiki. Te študije so prvič omogočile ugotoviti naravo porazdelitve mikroorganizmov v odsekih črevesja. Njihova primerjava z analizo iztrebkov pri istih bolnikih je pokazala, da se samo parietalni mikrobiota ustrezno prilagaja dinamiki bolezni in zdravljenju s probiotiki. Mikroflora iztisov ne kaže nobenih korelacij s procesom.

S sodobnimi metodami analize mikroflore in domnevno prevlado bifidobakterij ustvarja rutinska praksa analiziranja samo bifidobakterij in pogojno patogene mikroflore pri študijah dysbakterioze. Hkrati so eubacteria, bakteroidi in klostridije, ki so po sodobnih ocenah vsaj nekajkrat večji od bifidobakterij, padle iz vidnega polja mikrobiologa.

Uporaba metode masne spektrometrije je omogočil merjenje števila 50 taksonov črevesnih mikroorganizmov ne le v blatu, vendar v sami črevesu, z analizo njihovih markerjev (maščobne kisline) neposredno v biopsije. Študija je zaključila:

Mikrobiota črevesja je prevladujoči kontinuum sevov in vrst rodov Clostridium in Eubacterium z enakim številom bakteroidov, bifidobakterij in laktobacilov.

Treba je opozoriti na bistveno pomembno značilnost predstavnikov rodu Eubacterium, ki sestavljajo sposobnost oblikovanja vodika. Glavna značilnost mikrobnih konzorcija prevažajo prebavo organski substrat v anaerobnih procesov v naravi (močvirja), v vampu prežvekovalcev in v biotehnologiji pri anaerobni fermentaciji različnih vrst odpadkov in pridobivanje bioplina. Mucosalna plast človeškega črevesa je v bistvu enaka kot bioreaktor. Obstaja nastanek metana, zato deluje bakterija metanogena, katere učinkovitost je strogo odvisna od koncentracije vodika v sistemu. V metanogeni skupini vodikove bakterije igrajo ključno regulativno vlogo s povratnimi informacijami procesa proizvodnje in porabe vodika do primarnega procesa razdeljevanja ogljikovih hidratov v obliko acetata. Sprememba števila eubakterij, kar bi moralo voditi do povečanja koncentracije vodika v sistemu. Tako je eksperimentalno pokazal štirikratno povečanje koncentracije vodika v izdihanem zraku pri bolnikih s sindromom razdražljivega črevesja in njegovem vrnitvi v normalno stanje pri sprostitvi simptomov zaradi restriktivne prehrane.

Glavni delež (od 70% v jejunumu do 90 v blatu) mikroorganizmov v vseh delih črevesja so anaerobi. Drugo največje število v jejunumu je aerobnih aktinomicetov - 17% (samo 0,7% v blatu).

Aerobni kokci (stafilokoki, streptokoki, enterokoki) in korinformske bakterije predstavljajo 5% kolonizacije tankega črevesja v primerjavi z 0,7% v blatu. Delež enterobakterij in enterokokov v črevesnih odsekih in v blatu je blizu 2%.

Nepričakovani rezultat je nedvomno odkritje znatnega števila aerobnih aktinomicetov.

Kolonija aerobnih aktinomicete Nocardiopsis dassonvilley, izolirana iz stenske plasti tankega črevesa.

Visoka stopnja kolonizacije črevesja z aktinomicetami ni videti nenavadno, če upoštevamo, da so v okolju zelo razširjeni - tla, voda, zrak, na notranjih stenah stanovanjskih in industrijskih prostorov. Njihovo stanovanje v človeškem telesu v takšnih okoliščinah izgleda naravno.

Dejansko je v priročniku of Clinical Microbiology opozoriti odkrivanje aktinomicet in sorodnimi organizmi, kot so Mycobacterium, Actinomadura, Propionibacterium, aktinomicet, Corynebacterium, Bifidobacterium v ​​črevesju in drugih organih človeka. Tam se pojavljajo (vključno z bifidobakterijami) kot udeleženci v infekcijskih in vnetnih procesih (Mannual on Clinical Microbiology). Vendar pa je patogenost aktinomicetov, občutljivost na antibiotike, metode zdravljenja s tem povezanih bolezni predmet posameznih specializiranih laboratorijev in klinik na svetu.

Težave pri njihovi bakterijski diagnostiki in gojenju so bile ovira za razširjeno slavo teh mikroorganizmov v klinični praksi. Vključno s številnimi boleznimi, povezanimi s spremembami črevesne mikrobiote in kože.

Obsežna rast petrijevke bakterij iz biopsije tanke črevesne stene kaže na veliko število in raznolikost mikrobne skupnosti.

Mikroskopska goba iz stene tankega črevesja.

Pomemben zaključek za prakso diagnostike in spremljanja mikrobiote parietalne črevesja je bil podan s hkratnim določanjem koncentracije mikrobnih markerjev v krvi istih bolnikov. Izkazalo se je, da je njihova koncentracija v korelaciji s koncentracijo mikrobov na črevesni steni, merjeno z biopsijskimi vzorci. To je fiziološko logično, saj z naravno smrtjo mikrobnih celic njihovi lipidi razgrajujejo črevesni encimski sistem, maščobne kisline mikroorganizmov, ki se ne uporabljajo na njegovi steni, vstopijo v krvni obtok.

Ta pojav omogoča kontrolo stanja črevesne mikrobiote v skladu z analizo mikrobnih maščobnih kislin v kapljici krvi (40 μl) s prsta.

Opozoriti je treba, samo da je v krvi pade tudi mikrobne molekule, ki jih mikroorganizmi, ki živijo na drugih sluznicah človeka (orofarinksa, urogenitalnega trakta) in žarišča vnetja, ki jih povzroča ali vozbudilem lastno mikrofloro, ki je začel od zunaj.

Prisotnost markerjev mikroorganizmov takšnega izvora v krvi je teoretično posledica mehanizma imunskega odziva na pojav patogena. Fagocitne celice človeškega telesa adsorbirajo in prebavljajo antigene mikroorganizmov, vključno s celimi celicami, in odstranijo proizvode lizi v tok limfnih in cirkulacijskih sistemov. Poleg fagocitoze celice mikroorganizmov uničijo tudi drugi mehanizmi, vključno z njihovo lastno apoptozo in encimsko lizacijo beljakovinskega komplementa krvi in ​​drugih sestavin imunske zaščite. V vsakem primeru se uniči na koncu monomernim komponentam biopolimerov. Na podlagi osnov fiziologije izmenjave človeških bioloških tekočin pride do izmenjave 70% plazemske tekočine z medceličnim prostorom v 1 minuti. Zato majhni fragmenti mikrobnih biopolimerov, ki so nastali v tem prostoru, skoraj takoj vstopijo v kri. To pomeni, da prisotnost mikrobnih markerjev v krvi odseva sestavo mikrobnih skupnosti človeškega telesa, ne glede na habitat mikroorganizma ali vnetje.

Z drugimi besedami, z merjenjem koncentracije mikrobnih markerjev v krvi lahko ocenimo mikroekološko stanje osebe kot celote.

Pomemben spremembe v sestavi mikrobnih markerjev v krvi v primerjavi s statistično veljavnim normativom najdemo v peritonitis, vnetje urogenitalnega organov in kožnih bolezni - atopični dermatitis, seboroični dermatitis, ekcem, psoriaza, endokarditis, perikarditisa in vročinskih bolezni neznane etiologije.

Doktorica bioloških znanosti

Kako ohraniti normalno mikrofloro, učinek motenj mikroflore na razvoj bolezni, kot so vaginoza, prostatitis in moška neplodnost, alopecija (alopecija), atopični dermatitis, seborrhea, akne (akne) v naslednjih členih.

Metode za preučevanje mikroflore;

Metode za proučevanje normalne mikroflore

Preprečevanje disbioze

1. Racionalno predpisovanje antibiotikov in antiseptikov:

- - individualna izbira odmerka antibiotika (antiseptik), ob upoštevanju občutljivosti spektra mikroorganizma;

- - pri zdravljenju antibiotikov širokega spektra za jesti mlečnih izdelkov;

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

2. V dieto vključite fermentirane mlečne izdelke in izdelke, ki vsebujejo veliko vlaknin (otrobi, ovsena kaša, solate, jabolka, brusnice, lingvice, marelice, grenivke, črni ribez).

3. Preprečevanje, odkrivanje in zdravljenje dysbiosis (zlasti bakterijske vaginoze) pri nosečnicah. Hkrati se takšne ženske zdravijo zaradi črevesne dysbiosis.

4. Predčasno pritrjevanje otroka na dojke; ohranjanje naravnega hranjenja.

5. Imenovanje probiotikov (po možnosti po predhodnem bakteriološkem pregledu) novorojenčkom, pri katerih obstaja tveganje za razvoj dysbiosis.

Vrsta materiala za študijo je odvisna od biotopa v študiji in ocenjenega števila mikroorganizmov v njem. Material za študijo so pogosto natisi kože in sluznice, plošče, sluz iz zgornjih dihalnih poti, iztrebkov in vaginalne vsebine. Pri odvzemu materiala upoštevajte pravila asepsa.

Metode za odvzem materiala mikroflora:

- prejemanje naravnih iztrebkov (slinjenje, urin, iztis);

- način uporabe (tiskanje) - odstranitev mikroorganizmov, ki uporabljajo papirne filtre določenega območja in prenos filtrskih tiskov na površino agarnega medija;

- strganje sluznice;

- način pranja, navlaženih s sterilnim vatu vato iz kože ali sluznice;

- metoda aspiracije (iz interdentalnih prostorov, gingivalnih žepov, zgornjega in srednjega dela dihalnega trakta).

- odvzem materiala iz želodca in črevesja s sondami.

1. Bakterioskopska metoda ima neodvisno vrednost za biotope, v katerih živi veliko število različnih mikroorganizmov: ustna votlina, črevesje, vagina. Grama se obarva mrko in preučujejo se morfološke in tinktorične lastnosti mikroorganizmov.

Metoda daje splošno predstavo o številu mikroorganizmov, vam omogoča, da bi dobili splošno predstavo o sestavi mikroflore (prevlado Gram pozitivnim in Gram- bakterij v neki obliki, prisotnost gliv), kakor tudi za identifikacijo mikroorganizmov, ki se ne gojijo v medijih hranil.

2. Bakteriološka metoda se uporablja za biotope s široko paleto mikroorganizmov, izvaja se ob upoštevanju podatkov bakterioskopije.

Osnovna načela bakteriološke metode pri študiji mikroflore:

- bolje je takoj raziskati material, če je nemogoče nemudoma pregledati material, ga dostavite v laboratorij v epruveto s konzervansom v 2 urah, saj je pri daljšem shranjevanju razmerje med vrsto bistveno kršeno;

- primarno zasejevanje materiala se opravi brez predhodne obogatitve, saj obogatitev krši količinske razmerje vrste;

- uporabite velik niz hranilnih snovi, različne pogoje pridelave (aerobni, anaerobni, atmosfera WITH2);

- v kliničnem vzorcu se določi razmerje anaerobov in aerobov, kvalitativni (vrsta) in količinski (razmerje različnih vrst) sestava mikroorganizmov v mikroorganizmih specifičnega biotopa.

Kvalitativna detekcija posameznih posameznikov patogenih mikroorganizmov kaže na skrajno stisko v biotopu.

Pri kvantitativnem izračunu UPM v študijskem gradivu pripravimo vrsto razredčitev materiala (10 -2, 10 -4, 10 -6) in količinsko sejanje teh razredčitev opravimo na sektorjih skodelic z različnimi hranilnimi sredstvi. Za izolacijo enterobakterij se Levinov medij uporablja za izolacijo agarja za enterococci - žolčnika za Pseudomonas aeruginosa - furaginalni agar, za gobe - medij Saburo. Mikroorganizmi so opredeljeni s skupno metodo: UE bakterije se navadno identificirajo na vrsto, glive - v rod.

Število bakterij se določi po formuli:

CFU / ml (g) = število kolonij v določenem sektorju x faktor redčenja x 20,

kjer je 20 indeks pretvorbe na 1 ml pri setvi 1 kapljice (0,05 ml) raztopine materiala.

- določiti prisotnost dejavnikov patogenosti pri izbranih sevih (hemolizini, plazemski koagulazi, kapsule).

- po 5-7 dneh je priporočljivo ponoviti mikroorganizme za dysbiosis.

Mikrobiološki zaključek temelji na primerjavi rezultatov, dobljenih z uveljavljeno normo za določen biotop, ob upoštevanju starosti subjekta.

Literatura

1. Atlas medicinske mikrobiologije, virologije in imunologije / ed. A. A. Vorobyova, A. S. Bykov. M.: Medicinska informacijska agencija, 2003. 236 str.

2. Granite V.M. Chlamydia / V.M. Granites. M.: Medicinska knjiga, 2000. 192 str.

3. Kornev, I. I. Sterilizacija medicinskih izdelkov: referenčno vodilo / I. I. Kornev. SPb. : Človek, 2003. 156 str.

4. Korotyaev, A. I. Medicinska mikrobiologija, imunologija in virologija / A. I. Korotyaev, S. A. Babičev. SPb. : Posebna literatura, 2002. 591 str.

5. Krasilnikov, A. P. Referenčna knjiga o antiseptiki / A.P. Krasilnikov. Mn.: Visoka šola, 1995. 367 str.

6. Lobzin, Yu. V. Vaja laboratorijskih raziskav pri nalezljivih boleznih / Yu. V. Lobzin, Yu. P. Finogeev, V.F. Krumholts. SPb. : Elby-SPb, 2005. 274 str.

7. Mayansky, A.N. Mikrobiologija za zdravnike / A. N. Mayansky. Nizhny Novgorod: NGMA, 1999. 393 str.

8. Medicinska mikrobiologija, virologija in imunologija / ed. A. Vorob'eva, 2. izd., Kor. in dodajte. M.: Medicinska informacijska agencija LLC, 2006. 704 str.

9. Splošna in sanitarna mikrobiologija s tehniko mikrobioloških raziskav / ed. A.S. Labinskaya, L.P. Blinkova, A.S. Yoshina. M.: Medicina, 2004. 576 str.

10. Pozdeev, O. Medicinska mikrobiologija / ed. Acad. RAMS V.I. Pokrovsky. M.: GEOTAR-Med., 2001. 768 str.

11. Strachunsky, L. S. Sodobna antimikrobna kemoterapija: vodnik za zdravnike / L. S. Strachunsky, S. N. Kozlov. M.: Borges, 2002. 436 str.

12. Ursova, N. I. Sodobne metode za korekcijo črevesne dysbiosis pri otrocih: tutorial / N. I. Ursova, G. V. Rymarchuk, L. A. Shcheplyagina, K. I. Savitskaya. M.: Monica, 2000. 48 str.

13. Brooks, G.F. Medicinska mikrobiologija / G. F. Brooks, J. S. Butel, S. A. Morse. 24. izd. NY: McGraw-Hill, 2007. 832 str.

14. Harley, J.P. Laboratorijske vaje v mikrobiologiji / J.P. Harley, L.M. Prescott. 5. izd. Podjetja McGraw-Hill, 2002. 860 str.

15. Kayser, F.H. Medicinska mikrobiologija / F.H. Kayser. Thieme, 2005. 466 str.

16. Priročnik za klinično mikrobiologijo / ed. P. Murray. 8. izd. Washington DC: Americanh Society of Microbiology, 2003. 2322 str.

17. Talaro K. P. Fondacija v mikrobiologiji / K. P. Talaro. 4. izd. Podjetja McGraw-Hill, 2002. 698 str., Arthur Talaro.

18. http://bacterio.cict.tr - mesto družbe sistematične bakteriologije.

19. http://www.asm.org/search - spletno mesto Ameriškega združenja mikrobiologov (ASM).

VSEBINA

Seznam okrajšav. 3

Sekcije mikrobiologije.

Faze razvoja mikrobiologije.

Značilnosti mikroorganizmov.

Sistematika bakterij.

Morfologija bakterij.

Struktura bakterijske celice.

Kapsula

Flagella.

Fimbria.

Celična stena

Oblike bakterij z napako v celični steni.

Kislinsko odporne bakterije.

Periplazmični prostor.

Citoplazemska membrana.

Mesozomi.

Citoplazma.

Nukleotid.

Ribosomi.

Vključitve.

Endospores.

Sistematični položaj, morfologija, vloga v patologiji in metode študija spirochetov, aktinomicetov, rickettsiae, klamidije, mikoplazme.

Spirohete (treponema, borrelia, leptospira).

Actinomicetes.

Rickettsia.

Klamidija.

Mikoplazma.

Presnova in energija (metabolizem) v prokariontih.

Kemijska struktura in prehranske potrebe bakterij.

Prehrambeni mikroorganizmi.

Konstruktivni metabolizem.

Načini pridobivanja energije iz prokariontov.

Energetski metabolizem.

Presnovna usmeritev razvoja mikroorganizmov.

Rast in razmnoževanje mikroorganizmov.

Mikrobna rast.

Reprodukcija mikroorganizmov.

Metode razmnoževanja mikroorganizmov.

Mehanizem in faze enostavne delitve.

Počivalne oblike mikroorganizmov.

Protimikrobni ukrepi.

Metoda mikrobiološkega pregleda iztrebkov za določitev normalne mikroflore in izključitev črevesne dysbiosis.

Modularna enota 1.2

SEJA 1.2.1

Normalna mikroflora človeškega telesa. Dysbiosis

preučevanje prevladujoče in prehodne mikroflore biotopov človeškega telesa;

normalne funkcije mikroflore, vzroki za nastanek disbioze.

Študent mora vedeti:

1. Kakovostna in količinska sestava normalne mikroflore človeškega telesa, njegova funkcija.

2. Dejavniki, ki vplivajo na kvantitativno in kvalitativno sestavo normalne vrednosti

mikroflora človeškega telesa.

3. Metode za preučevanje kvalitativne in količinske sestave normalne mikroflore, merila vrednotenja.

4. Vzroki in pogoji za pojav dysbakterioze, njihov popravek.

5. Razvoj naravne mikroflore pri novorojenčkih in majhnih otrocih.

Študent mora biti sposoben:

· Vzeti material za preučevanje mikroflore človeškega telesa;

· Oceniti kvalitativno in količinsko sestavo mikroflore.

Študent mora imeti:

· Mikrobiološke raziskovalne metode za biomateriale iz različnih biotopov človeškega telesa

Delovna številka 1. Mikroflora kože

Cilj: Preučevanje mikroflore kože.

Neodvisno delo: ovrednotiti rezultate posevkov iz kože rok z metodo odtisa na MPA in okolje Endo Skica, opišite. Zaključite.

A) sreda MPA

Opišite kulturne lastnosti kolonij, gojenih na MPA (najbolj značilen za ta pridelek). Rezultati, ki jih prinesete v tabelo. Iz teh kolonij pripravite brisače, madež Gram. Skica.

S 8rlW0IYw5lL6qkWr / dKNSOzVbrI68Dk10kz6zOV2kEkUZdLqjvhDq0d8aLH63B2tgpdVncRpv6 + x f836r + aZtk / 7rVJXi / l + DSLgHP7C8IvP6FAy08EdyXgxKEgznhIUJPEqBcGBJL1h5cBOcpuCLAv5 f0L5AwAA // 8DAFBLAQItABQABgAIAAAAIQC2gziS / gAAAOEBAAATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAABb Q29udGVudF9UeXBlc10ueG1sUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhADj9If / WAAAAlAEAAAsAAAAAAAAAAAAA AAAALwEAAF9yZWxzLy5yZWxzUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhALoAkoE1AgAAUAQAAA4AAAAAAAAAAAAA AAAALgIAAGRycy9lMm9Eb2MueG1sUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhAIV1HJ7fAAAACgEAAA8AAAAAAAAA AAAAAAAAjwQAAGRycy9kb3ducmV2LnhtbFBLBQYAAAAABAAEAPMAAACbBQAAAAA = "> Priprava 1 Priprava № № 2

B) Sreda Endo

- preučiti posevke na mediju Endo, da bi identificirali E. coli (lac + kolonije). Na Gramu naredite brste laktoze pozitivnih kolonij in madežev. Označite prisotnost ali odsotnost kontaminacije s fekalijami.

B z1LuOp0YM9cOW5YLDfb03FB52B2dhc / Z3ct6c9lucemSpzQ9fC / 0HK29vRnXj6AijfFvGX71RR0K cdr7I1dBdRbkkSjTKSgJk4UR3gub5RR0kev / + sUPAAAA // 8DAFBLAQItABQABgAIAAAAIQC2gziS / gAAAOEBAAATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAABbQ29udGVudF9UeXBlc10ueG1sUEsBAi0AFAAGAAgA AAAhADj9If / WAAAAlAEAAAsAAAAAAAAAAAAAAAAALwEAAF9yZWxzLy5yZWxzUEsBAi0AFAAGAAgA AAAhACVWpV9UAgAAagQAAA4AAAAAAAAAAAAAAAAALgIAAGRycy9lMm9Eb2MueG1sUEsBAi0AFAAG AAgAAAAhAMXpSV / bAAAABgEAAA8AAAAAAAAAAAAAAAAArgQAAGRycy9kb3ducmV2LnhtbFBLBQYA AAAABAAEAPMAAAC2BQAAAAA = ">

Delovna številka 2. Mikroflora ustne votline

Cilj: Preučiti mikrofloro plošče.

Neodvisno delo: pripravite raztrgane plošče, madež Gram in Burri-Hins, ocenite rezultat, sklepajte.

a) s sterilno palico, vzemite material iz interdentalnega prostora;

b) pripravo pripravka za mazanje; Barva grama (zdravilo št. 1);

c) pripravo pripravka za mazanje, madež po Burri-Hinsu (priprava št. 2);

d) rezultate za vnos tabele.

Delovna številka 3. Mikroflora gastrointestinalnega trakta

Cilj: Preučiti mikrofloro gastrointestinalnega trakta.

Neodvisno delo: oceniti rezultat testa iztrebkov za dysbakteriozo z uporabo pripravljenih pridelkov in brisov. Skica, opišite. Glede na rezultate mikrobiološke preiskave iztrebkov priporočamo zdravila - probiotike za odpravo disbakterioze. Zaključite.

Naloga: material (iztrebki) je bil dostavljen v bakteriološki laboratorij za raziskave o disabereriozi. Pridelki so bili narejeni za diferencialna diagnostična okolja: Endo, Kalina, Blaurokka.

a) opisujejo kulturne lastnosti kolonij.

Sreda Blaurokka (za bifidumbakterije)

Sreda Endo (DDS za lak + bakterije)

Sreda Kalina (za enterokoke)

b) z uporabo pripravljenih madežev, pripravljenih iz odraslih kolonij, opisujejo morfološke in tinktorične lastnosti mikroorganizmov. Barva grama.

Od srede do Blaurocka

Od srede Kaline

Rezultati mikrobiološkega pregleda feces:

GBOU VPO TyumGMA, Multidisciplinarna klinika

Mikrobiološki pregled iztrebkov

(izven 91500. 11. 0004-2003)

Številka vzorca _____________ primarno, ponovil (poudaril)

Polno ime Pacient ____ Petrov P.P.________________________________________________

"____" _____________ 20 ____ g. Zdravnik _________________

c) razložiti namen in mehanizem delovanja probiotikov, ob upoštevanju sprememb v kvalitativni in količinski sestavi mikroflore, razvrstiti predlagana zdravila. Rezultati za vnos tabele:

Delovna številka 4. Urogenitalna mikroflora

Cilj: preučiti sestavo urogenitalne mikroflore.

Neodvisno delo: za pripravljene pripravke, obarvane z Gramom, za oceno stopnje čistosti vaginalnih izločkov. Rezultati, ki jih prinesete v tabelo.

Samostojno učenje po šolskih urah

Opredelitev pojmov:

1. Stalna (obvezna) mikroflora - ____________________________________________________________________

2. Naključna (prehodna) mikroflora -__________________________________________________________________________________

Mikroflora kože

Metode sanitarnega in biološkega preučevanja kože:

Peroralna mikroflora

Obvezna mikroflora ustne votline: ______________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________

Prehodna mikroflora ustne votline: __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Vloga sline pri ohranjanju skladnosti mikroflore _______________________________

Metode študije mikroflore ustne votline

Gastrointestinalna mikroflora

Želodčna mikroflora: __________________________________________________________

Mikroflora tankega črevesja: _______________________________________________

Obvezna mikroflora v debelem črevesju je: _________________________

Prehodno mikrofloro v debelem črevesju predstavlja: _______________________

Mikroflora moške sečnice predstavlja: _______________________________________

Vaginalna mikroflora, ki jo zastopa: ___________________________________________

Probiotiki so ______________________________________________________________

Teoretično ozadje

Mikroflora človeškega telesa je razdeljena na konstantno (sopomenke: prevladujoče, obvezne, primarne, rezidentne, avtohtone, avtohtone) in naključno (sinonimi: asociativni, neobvezni, dodatni, prehodni, alohtoni). Konstantna mikroflora vsebuje predstavnike, značilne za določen biotop, in asociativne vključujejo mikroorganizme, ki so padli od zunaj.

Naravna mikroflora človeškega telesa

Za delo številka 1

1. Koža, še posebej njeni izpostavljeni deli, se zaseže z različnimi mikrobi. Tako se med sanitarnimi in higienskimi postopki iz kože človeškega telesa izloči od 85 do 120 milijonov mikroorganizmov. Mikroflora kože sestoji ne le iz mikroorganizmov na površini, temveč tudi globoko v koži (folikli las, kanali lojnih in znojnih žlez).

Na umazani koži mnogi mikrobi ne zmorejo samo vzdrževati vitalnosti, temveč tudi pomnožiti. Na površini čiste kože mikroorganizmi hitro umrejo.

Prehajanje mikrobov kože zagotavljajo mrtve celice epitelija, pa tudi izločanje znoja in lojnic. Večina mikroorganizmov, vključno s patogeni, ne prodre skozi nedotaknjeno kožo. Če se poškoduje celovitost kože in zmanjša splošna odpornost mikroorganizmov, se na koži lahko pojavijo različne bolezni: pustularni elementi, okuženi z maceracijo, ki jo povzročajo bakterije, glive, virusi.

Mikroflora kože je sestavljena iz mikroorganizmov, ki trajno živijo na njem, in različnih invazivnih mikroflore, ki prihajajo iz zunanjega okolja - iz vode, zraka, tal, v stik z umazanimi predmeti zunanjega okolja ali votlinami (usti, črevesa, nosne votline itd.).

Na površini kože se nahajajo Cocci (stafilokoki, streptokoki), pogosteje nepatogeni (sarkini, dipteroidi, bacili, kvas in kvasovke).

Najpogosteje (80-90%) na koži je določen epidermalni staphylococcus Staphylococcus epidermidis, - zlati in limono-rumeni stafilokok.

Sanitarno-bakteriološki pregled kože poteka na dva načina:

1) sejanje prstnih odtisov na kozarce z MPA ali na posebnem mediju (na primer krvni agar), ki mu sledi makroskopski in mikroskopski pregled rastlinskih kolonij;

2) izpiranje iz rok, za izvajanje katerega se uporablja navlaženi bombažni tampon, ki briše bolnikove roke, začenši z manj onesnaženih površin kože: zadnji del roke, dlani, interdigitalne površine, nohtne postelje in podne površine. Bris se potopi v sterilno slanico (8-10 ml), tekočine temeljito pretresemo in pregledamo za TBC in za prisotnost E. coli.

Določitev celokupne mikrobne številke - TBC.

Postopek: 1 ml pranja se vnese v sterilno posodo Petri, nato se zlije s 12-15 ml stopljenega in ohlajenega na 45 ° C MPA, nato se po strjevanju agarja kultivirajo 24 do 48 ur pri 37 ° C. Odrasle kolonije se štejejo na površino skodelice in globoko v agarju s povečevalnim steklom.

Opredelitev E. coli.

Preostalo količino izpiralne plasti položimo v epruveto s 5 ml Kesslerjevega medija in inkubiramo v termostatu pri 43 ° C. Naslednji dan se Endo poseže v sredo. Če se pojavijo kolonije, značilne za E. coli, se pojavi E. coli in se naredi fekalna kontaminacija kože.

Kesslerjev medij vsebuje žolč, encijanovo vijolico, pepton, laktozo. E.coli fermentira laktozo, da se tvori plin, ki se kopiči v plavuti.

Delati številka 2

2. Mikroflora ustne votline in zgornjih dihalnih poti je raznolika in številna, tu najdemo več kot 100 vrst mikroorganizmov. Zlasti veliko jih je lokalizirano v plaki - v 1 g suhe mase vsebuje okoli 250 milijonov mikrobnih celic.

V ustih je ugodne pogoje za aktivnosti mikroorganizmov - je alkalna reakcija sline, ostankov hrane termostata temperature in vlažnosti. V različnih delih ustne votline mikroflora ni enaka. Na stranskih površinah ust je nekaj mikrobov. Površina peresa, zlasti zadnji del, in zadnji del nazofarinksa vsebuje veliko količino mikroorganizmov. Tu prevladujejo streptokoki, sartsiny, spirohete, fusiform coli, Staphylococcus in druge. Opažena je široka paleta mikroflore med zobmi in vrzeli v grobnicah mandljev, kjer je epitelijskih ostanki, bakterije in nanosi tvorjen tonzilarnega svečke, vendar prevladujejo streptokokov in diplokokov. Skupina prebivalcev obsega Streptococcus (Str salivarius, itd...) nepatogeni stafilokoki, diplokokov, Corynebacterium, Lactobacillus, veylonelly, Treponema (Tr buccalis -. najpogostejši tip), kvasovke, kot glivice (Candida albicans), aktinomicet, Mycoplasma, protozoji.

Med fakultativni mikroorganizmi tam enterobakterije (Escherichia rodovi, od Klebsiella, Proteus enterobakterije), Pseudomonas aeruginosa, spore - Bacillus, Clostridium in peptostreptokokki in peptokokki. Nekaj ​​časa v ustni votlini lahko traja vibrios, spirohete, davica bacillus in meningokoku, itd..

Pri ohranjanju kvantitativno in kvalitativno konstantnosti normalne mikroflore v ustih sline igra pomembno vlogo, ki ima antibakterijsko aktivnost zaradi vsebnosti encimov (lizocim, laktoferin, peroksidaza, nukleaze) in sekrecijsko imunoglobulina. Posamezne razlike v sestavi mikroflore ustne votline je odvisno od starosti, higienskih navadah, prehrani, splošno odpornost organizma in odpornost sluznice, prisotnost zobnih okvar.

Običajno oralno mikroflora zagotavlja njegovo zaščito s konkurenčno antagonizem proti patogenih mikroorganizmov, kot so davica patogenov patogeno stafilokoki in streptokoki in meningokoku, oportunistična in patogenih gliv. V primeru kršitve mikrofloro, tj pojav dysbiosis, patogene in pogojno patogenih mikroorganizmov lahko povzroči bolezni ustne votline ali za zagotavljanje tako imenovane okužbe navzdol, tj migracija mikroorganizmov iz ustne votline na žrelu, grla, želodca, sapnika, bronhijev in pljuč.

Za preučevanje mikroflore ustne votline z naslednjimi metodami:

a) bakteriološko - sajenje biomateriala na hranilnih medijih z naknadno identifikacijo mikroorganizmov;

b) bakterioskopska (pomožna diagnostična metoda) - preparati sukancev so pripravljeni, barvani po Gramu, v skladu z Lefflerjem in Neisserjem, Tsil-Nielsenom, Burri-Hinsom, mikroskopsko. Določite morfološke in tinktorske lastnosti patogenov.

Za delo številka 3

3. Mikroflora prebavnega trakta.

Mikroflora želodca ni številna, obstajajo sarcini, kisline odporne in spore oblikovalne bakterije, kvasne glive.

Mikroflora tankega črevesja je prav tako redka (zaradi delovanja encimov), v biotopu pa najdemo laktobakterije, kvasovke in kvasovke.

Velika črevesna mikroflora: v debelem črevesu je najbolj raznolika v sestavi mikroflora.

Biomasa mikroorganizmov, ki prebivajo v črevesju odraslega, je 2,5-3 kg in vključuje do 450 vrst.

Normalna črevesna mikroflora je 92-95%, sestavljena iz strogo anaerobnih vrst, ostalo je aerobov.

Mikrobiološke preiskave blata se izvede za določitev statusa normalne mikroflore ali odpraviti črevesne dysbiosis, znaki za to so različni - predoperativni pregled bolnikov, črevesne okužbe neznane etiologije, črevesja disfunkcija po antibiotičnega zdravljenja, diagnosticiranja in specifikacijo drugih.

Metoda mikrobiološkega pregleda iztrebkov za določitev normalne mikroflore in izključitev črevesne dysbiosis.

Fekse zberemo s sterilnim steklenim drogom v sterilne ponderirane posode, zbirajo se topli domači iztrebki, dostavijo v laboratorij najkasneje 2 uri pozneje.

Testni blato thioglycolate so dani v pufru (ki prispevajo k ohranjanju tako aerobne in anaerobne mikroflore), nato pripravo razredčine desetkratno supernatanta v slanici in zasadili na izbirnih in diferencialno diagnostiko mediji oz dodeljenega skupin mikroorganizmov, tako aerobne in anaerobov. Pridelki na fakultativnih anaerobah inkubiramo v običajnem termostatu pri 37 ° C.

Iz vzgajanih sumljivih kolonij je izolirana čista kultura mikroorganizma, izvedena je popolna študija vseh lastnosti (kulturne, morfološke, biokemijske, patogene itd.), Identificirane z vrsto, podvrstami, tipom.

Identifikacija poteka tako za izolirane patogene in pogojno patogene patogene kot tudi za predstavnike običajne mikroflore črevesja.

Hkrati smo plošče prešteli število kolonij določenega rodu, vrste in pri izračunu setev odmerkih in gojenje v pufru, iz katere se cepljenje pripravi določitev mikroorganizmov v 12 g blata upoštevati.

Število ugotovljenih mikroorganizmov je izraženo v decimalnih logaritmih.

Dobljene rezultate primerjamo z referenčnimi podatki in sklepamo o stanju črevesne mikroflore.

Značilnosti normalne človeške črevesne mikroflore:

1. Bifidobakterije (rod Bifidobacterium).

Hude anaerobi. Imajo prevladujoč položaj v obvezni mikroflori črevesja zdravega človeka, imajo visoko antagonistično aktivnost. Imajo svoje ime zaradi značilne razvejitve na koncu palic - bifirculations. Gojenje se izvaja na posebnem hranilnem mediju Blaurokka, v epruvetah v anaerobnih pogojih.

Blaurock medij pripravimo kot sledi: - dodamo jeter brozge peptona, natrijev klorid, navaden agar, laktoze, cistein hidroklorid, medij steriliziramo in se regenerira z vrenjem za 40-45 minut.

Kulturne lastnosti bifidobakterij. V okolju Blaurokke, v debelini okolja, bifidobakterije dajejo značilno rast dna - v obliki "točk z repi" ali majhnimi kepicami.

Morfološke lastnosti bifidobakterij. Karakteristične Gr + palice z razvejanimi ali zgoščenimi konci, ki se nahajajo v obliki rimskih petelin ali grozdov, ki spominjajo na kitajske hieroglifi, se zabeležijo v kapi.

2. E. coli(Escherichia coli).

Faktorski anaerobi. Ravni Gr-palice z zaobljenimi konci.

DDS - sredstvo Endo (hranilni agar, 1% laktoza in indikator - osnovni fuksin, beljen z natrijevim sulfitom). Sveže pripravljen medij je brezbarven ali ima bledo roza barvo. Z rastjo Escherichia coli (laktoze pozitivnih bakterij) so barve v temno rdeči barvi s kovinskim sijajem; laktozo negativne bakterije tvorijo bledo roza kolonije.

3. Enterococci (vrsta Enterococcus).

Aerobi. Trenutno se odkrijejo 2 vrste enterokokov - 1) Ent. fecalis in 2) Ent. faecium. Enterococci gojijo na Kalinovem mediju.

Sreda Kalina - DDS za enterokokov pripravimo iz 1,5% PIA vsebuje glukozo, kvas hidrolizat, mleko, polimiksin, kristal vijoličnim barvilom (aq).

Na tem mediju se dve tipi enterokokov razlikujejo po kulturnih lastnostih - prvi tip daje kolonijam majhne ali srednje velike svetle, rdeče češnje, drugo rožnate, rožnato-sive kolonije.

Morfološke lastnosti enterokokov - v razmazu so vidne kratke verige Gr + cocci, včasih podolgovati ali izolirani kokci.

Delati številka 4

4. mikroflora urogenitalnega sistemy.Pochki, sečevodov in urina v mehurju običajno sterilna. Na zunanjih genitalij moških in žensk se odkrijejo mikobakterije smegma (Mysobasterium smegmatis) patogeni, včasih patogenih stafilokokov monokokki, Corynebacterium, Mycoplasma, ampak monotone krajinske mikroorganizmi vključuje vrste Shema 2-3-4. Uretra žensk je ponavadi sterilna. Sečnice je majhno število moških ima mikrofloro - patogeni koki, se saprofitov, kvasovke. Vaginalni mikroflora je raznolika, vendar ni konstantna, odvisno od mnogih faktorjev, vključno s tistimi iz jajčnikov, starost in splošno odpornost organizma, kot tudi raven glikogena v epitelnih celicah vagine in pH vaginalnih izločkov. Takoj po rojstvu žensko dogaja kolonizacijo vaginalne laktobacilov, potem kokalna floro. V odrasli dobi, razen nepatogenih mlečnokislinske bakterije in koki, so patogeni streptokoki, Klebsiella, Bacteroides, anaerobne bakterije, mikoplazme, kvasovke, plesni Candida. Toda glavni in najpomembnejši predstavnik normalne mikroflore vagine je Las. vaginalis (palice Doderlein), vaginalne palice. Vaginalne palice imajo dve obliki - nekateri med njimi so velike, Gram-pozitivne, z ostrimi konci odsekan, drugi - tanka, občutljiva, s konicami, razporejeni posamezno ali v parih. Mikroorganizmi so določene, da ne tvorijo spore, kapsule, fakultativnih anaerobnih. Najboljši gojišče je jetrna juha dopolnjenem z 2% sladkorja grozdja, sladkornih delov ali jeter juhe, oblika R- in S- tvori kolonije. Imeti precej izrazito biokemijsko aktivnost.

V nekaterih primerih se pojavijo v vaginalne mikroflore in vzrok bolezni mikrobi, kot so patogene ali oportunistično patogene stafilokoki, streptokoki, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella, klamidijo in mikrobne združevanja.

Klamidija, ki povzroča trenutno pogosto klamidijo, ni reprezentativna za normalno mikrofloro vagine. Odkrivanje klamidije v strganju ali raztrganju vedno govori o patološkem procesu, tudi če ženska nima klinike - v tem primeru obstoji obstojnost - pred začetkom klinične bolezni.

Oboleli organi urogenitalnega trakta, ki jih mikoplazma povzroča, klamidija, Klebsiella, kompleks tako v diagnostiki in zdravljenju. Težave pri diagnozi strukturne značilnosti in gojenje mikroorganizmov povzročajo - kot Mycoplasma in klamidije večkrat intracelularno in Klebsiella imajo kapsulo in zahtevajo posebne metode obarvanje.

Mikrobiološka študija vaginalne mikroflore vključuje dve raziskovalni metodi - mikroskopsko in mikrobiološko, s sproščanjem čiste kulture patogenov.

Mikroskopski pregled sestavlja določitev stopnje čistosti vaginalne sekrecije (Heyrlinova shema) v mastnem ali strgalnem pripravku, vzetem s sterilnim brisom ali posebnim orodjem.

Obstajajo 4 stopinje čistosti vaginalnega izločanja med madežem:

• na prvi stopnji - vaginalni bacili najdemo v čisti kulturi in skromnem številu skvamoznih epitelijskih celic;

• pri drugi stopnji čistosti - poleg vaginalne palice v razmazu določimo majhno količino tujih bakterij (cocci in drugih nepatogenih mikroorganizmov) in skvamoznih epitelijskih celic;

• za tretjo stopnjo čistosti je značilna zelo nizka vsebnost vaginalnih bacilijev, veliko število kokcijev, bakterij in obilje levkocitov;

• pri četrti stopnji pogostosti - vaginalne palice so popolnoma odsotne, veliko število različnih kokijevih, paličastih bakterij, glivic, mikoplazme, Klebsiella itd. Leukociti so v velikem številu.

Mikroflora tretje in četrte stopnje čistosti je treba obravnavati kot vaginalno diskakteriozo, vendar pri ženskah v menopavzi ali v starosti je pogosta in se ne šteje vedno kot patologija.

V vaginalni vsebini v patologiji lahko najdemo patogene ali pogojno patogene mikroorganizme, kot so gonokoki, stafilokoki, klamidija in protozoji.

Najpogostejši povzročitelj najpreprostejšega je vaginalna trihomona - Tr. Vaginalis je označena protozoa, dolga 5-30 μm, ima 3-5 flagella, ki povzroča trichomonas colpit.

Da bi odkrili ta patogen, se vaginalne sekrecije vzamejo z vato ali žlezasto žlico, postavljeno na ogrevan stekleni drsnik, pokrito s stekleno prevleko in mikroskopsko. Trichomonas vaginalni najdemo tudi v obarvanih brisih - Gram, Romanovsky-Giemsa.